morfologia met. barwienia, Medycyna, Mikrobiologia
[ Pobierz całość w formacie PDF ]
//-->MORFOLOGIA DROBNOUSTROJÓW:opis komórki bakteryjnej(łącznie z jej strukturami)badania mikroskopowekształt, wielkość,ułożenie,sposób barwieniabudowa komórki [cytoplazma+DNA+rybosomyściana komórkowabłona cytoplazmatycznaelementy dodatkowe: otoczka,rzęski, fimbrie, przetrwalniki,ziarnistości,plazmidy, transpozony,opis kolonii(hodowla na podłożach stałych !)Kolonia – „skupisko komórek”, „klon”, zespół komórek tego samegogatunku (pochodzący z jednej komórki) na podłożu stałymkształt, wielkość, brzeg, powierzchnia, „wyniosłość”, kolor, konsystencja,zapach, zawieszalność, inne: np.: typ hemolizy na podłożach z krwią:beta – całkowita liza erytrocytów np.:S. aureusalfa – niecałkowita liza erytrocytów np.:S. pneumoniaegamma – brak hemolizy np.:Staphylococcus epidermidisI.II.III.typ wzrostu na podłożach płynnychbezwzględne tlenowcew postaci kożuszka (Bacillussubtilis)wzrost dyfuzyjny (w całej objętości podłoża)fakultatywne beztlenowcebezwzględne beztlenowce(Staphylococcusaureus, Escherichia coli)w postaci osadu (Clostridiumtetani)Kształt i ułożenie:Kulisty– ziarenkowce = ziarniaki:dwoinki (Streptococcuspneumoniae– dwoinka zapalenia płuc),paciorkowce (Streptococcuspyogenes– paciorkowiec ropotwórczy),gronkowce (Staphylococcusaureus– Gronkowiec złocisty),pakietowce = sześcianki (Sarcina spp.)tetrady = czworaczki (Micrococcusluteus)Cylindryczny– pałeczki (Escherichiacoli– pałeczka okrężnicy),- laseczki (Bacillusanthracis -laseczka wąglika)- wrzecionowce (Fusobacteriumnucleatum)Ziarniakopałeczki (Yersiniapestis– pałeczka dżumy)Maczugowce (Corynebacteriumdiphtheriae- Maczugowiec błonicy)Spiralny– przecinkowce (Vibriocholerae– przecinkowiec cholery,Campylobacterjejuni),- śrubowce (Spiryllumminor),- krętki (Treponemapallidum –krętek blady,Leptospira interrogans,Borrelia burgdorferii)Sposób barwienia w metodzie Grama:Ziarenkowce – większość Gram-dodatnio (kolor fioletowy), wyjątek np.: Gram-ujemna dwoinka zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych -Neisseria meningitidisPałeczki – większość Gram-ujemna (kolor czerwony), wyjątek np.: Gram-dodatniaListeria monocytogenes, Corynebacteriumspp.Laseczki – Gram-dodatnieGrzyby – Gram-dodatnieMaczugowce – Gram-dodatnieBakterie spiralne – Gram-ujemneKrętki – brak wybarwienia w metodzie GramaPromieniowce – Gram-dodatniePrątki kwasooporne – brak wybarwienia w metodzie GramaMetody barwienia drobnoustrojówBakterie prawie nie załamują światła, w związku z tym aby je uwidocznićtrzeba użyć barwnych związków chemicznych – barwników:- kwaśne służą zazwyczaj do barwienia cytoplazmy oraz składnikówpozakomórkowych (eozyna, fuksyna kwaśna, nigrozyna)- zasadowe (auramina, błękit metylenowy, czerwień obojętna, fiolet krystaliczny,fuksyna zasadowa) wybarwiają głównie struktury jądrowe.Preparat wykonujemy a) z materiału pobranego od chorego –preparat bezpośredni,b) z 18-24h hodowli drobnoustrojów –preparat pośredni.Techniki barwienia:proste1 barwnikzłożone 2 barwnikipozytywnebarwienie struktur drobnoustrojównegatywnebarwienietła(nigrozyna,tuszchiński–barwnikigrubodyspersyjne) – ocena kształtu i ułożenia komórekpozytywno-negatywnenigrozyna, tusz chiński + barwnik zasadowy –uwidocznienie otoczkispecjalnewizualizacja dodatkowych struktur komórki np.: barwienie rzęsek(metodaLeifsona),ścianykomórkowej,otoczki(metodanegatywna),przetrwalników(m. Wirtza-Conklina, Dornera), ziarnistości (m. Neissera)METODY BARWIENIAPrzygotowanie preparatu (z hodowli) do barwienia:przygotowanie rozmazu na szkiełku podstawowymkropla 0,85%NaCl + 1 kolonia bakteryjnawysuszenie rozmazu (ogrzanie nie wyschniętego preparatu powoduje uszkodzenie komórki)utrwaleniepreparatu (przeciwdziała zmyciu preparatu podczas barwienia, ułatwia wnikaniebarwnika): metody fizyczne (3-4 krotne w płomieniu palnika) i chemiczne (95% etanol)TypbarwieniaPROSTEPrzykładZastosowanieMetoda LöffleraBarwnikMetodykaBłękit metylenowy- 5’Spłukać wodąWynikJednoliteniebieskie,(wyjątekCorynebacteriumnierównomiernezabarwienie)PROSTE-Safraninaj. w.JednoliteczerwonezabarwieniePROSTE-Fiolet krystalicznyj. w.JednolitefioletowezabarwieniePROSTENegatywnedrobnoustrojówZŁOŻONE Pozytywno-negatywnea) obserwacja otoczek a) Nigrozyna +fuksyna fenolowa Ziehlawg Burri-Ginsab) metoda Dornera –barwienieprzetrwalnikówZŁOŻONE MetodaGrama -Podział bakterii naGram – dodatnieiGram - ujemneZŁOŻONE Metoda WaysonaDo barwienia preparatówbezpośrednichFiolet krystaliczny2- 3’ (spłukać wodą)Płyn Lugola 1-2’ (spłukać),„odbarwiacz” 30’’, (spłukać wodą)fuksyna zasadowa30’’, (spłukać wodą)Barwnik Waysona - 2’ (fioletkryst.+ bł. metyl.)(spłukać wodą)Komórki bakteriiciemnogranatowe,inne np.:komórki nabłonkowe,leukocyty jasno-fioletowo-granatoweGram (+) –fioletoweGram (-) –czerwone1-szy etap j. w., utrwalić w płomieniu,dobarwićfuksyną fenolową1-2’, (spłukać)b) 1-szy etap j. w., dobarwićsafraninąnagorąco! (spłukać wodą)Ciemne tło, jasne otoczkiCzerwonekomórki bakteriiCiemne tło,czerwoneprzetrwalnikiNigrozyna/tusz chińskina brzegu szkiełka Tło ciemne, nie zabarwione(jasne) komórkiz kroplą barwnika, zrobić rozmaz 2-imszkiełkiem, wysuszyćDo obserwacji kształtu podstawowego zmieszać kolonię bakteryjną
[ Pobierz całość w formacie PDF ]